《植物生理学报》 2007, 43(5): 847-851

水稻NADP- 苹果酸酶的原核表达、纯化和抗体制备

程玉祥*，柳参奎

东北林业大学盐碱地生物资源环境研究中心，哈尔滨150040

通信作者：程玉祥；E-mail: chengyuxiang111@sina.com.cn；Tel: 0451-82191402

摘　要：

构建了水稻 NADP-ME2 基因 cDNA 的原核表达载体 pQE30，并诱导表达出有生物学功能的融合蛋白。用 Ni-NTA 琼脂糖亲和层析纯化出NADP-ME2 融合蛋白，并测定了融合蛋白酶学特性(Vmax、Km、Kcat、底物特异性)。用纯化的NADP- ME2 融合蛋白免疫家兔，制备出抗水稻 NADP-ME 特异性抗体。全蛋白双向电泳后 Western 印迹表明水稻中至少有 4 个 NADP-ME 家族蛋白质成员。

关键词：水稻；NADP -ME2；原核表达；酶学特性；抗体

收稿：2007-06-26   修定：2007-08-28

资助：国家高科技研究发展计划(2002AA241111)和东北林业大学校立科研基金。

水稻NADP- 苹果酸酶的原核表达、纯化和抗体制备

程玉祥*，柳参奎

东北林业大学盐碱地生物资源环境研究中心，哈尔滨150040

Corresponding author: ; E-mail: chengyuxiang111@sina.com.cn; Tel: 0451-82191402

Abstract:

构建了水稻 NADP-ME2 基因 cDNA 的原核表达载体 pQE30，并诱导表达出有生物学功能的融合蛋白。用 Ni-NTA 琼脂糖亲和层析纯化出NADP-ME2 融合蛋白，并测定了融合蛋白酶学特性(Vmax、Km、Kcat、底物特异性)。用纯化的NADP- ME2 融合蛋白免疫家兔，制备出抗水稻 NADP-ME 特异性抗体。全蛋白双向电泳后 Western 印迹表明水稻中至少有 4 个 NADP-ME 家族蛋白质成员。

Key words: 水稻；NADP -ME2；原核表达；酶学特性；抗体